Virus Iridiscente de Hemocitos del Camarón (SHIV) Defensor mundial de la acuicultura

En China, un virus que causa una grave mortalidad en el camarón blanco del Pacífico

Los síntomas clínicos de L. vannamei dieron como resultado la exposición a un posible virus iridiscente en comparación con los síntomas del grupo de control. (a) la apariencia de los camarones. b) parte del hepatopáncreas.

El virus iridiscente recién descubierto, que causa una enfermedad grave y una alta mortalidad en el camarón blanco del Pacífico (Litopenaeus vannamei) cultivado en Zhejiang, China, ha sido controlado y denominado provisionalmente virus iridiscente de hemocitos del camarón (SHIV). Este artículo resume la edición original (DOI: 10.1038 / s41598-017-10738-8).

Nota del editor: Hay 12 coautores en este estudio, pero solo enumeramos los correspondientes. La información sobre los nombres y afiliaciones de todos los coautores se puede encontrar en la publicación original.

Fondo

En los últimos años, los episodios de enfermedades infecciosas (brotes localizados) en la granja de L. vannamei han causado importantes daños económicos en China. El SHIV se detectó e identificó por primera vez en muestras de L. vannamei (2-3 cm) cultivadas en el estanque y recolectadas en diciembre de 2014 de una granja en la provincia de Zhejiang, China. Los animales afectados murieron en masa y tenían atrofia hepatopancreática de color lejía, estómago e intestinos vacíos y conchas blandas. Los resultados de las pruebas de los métodos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) mostraron que las muestras fueron negativas para varios virus conocidos del camarón, incluidos WSSV, IHHNV, VPAHPND, YHV y TSV11.

Los resultados del estudio epidemiológico también mostraron que este puede no ser el primer brote en esta granja. Las muestras recolectadas en 2014–2016 arrojaron resultados positivos para el SHIV en 89 de 57 especímenes de L. vannamei, 5 de 33 especímenes de camarón blanco chino (Fenneropenaeus chinensis) y 5 de 10 camarones de agua dulce gigantes (Macrobrachium rosenbergii). Las más de cinco provincias de China en 20 provincias, lo que genera preocupaciones de que el virus podría extenderse ampliamente a las áreas de cultivo de camarón circundantes.

Ellos, SHIV, Tabla 1

Especies de camarón Negativo Positivo Total Tasa positiva

L. vannamei 486 89 575 15,5%
F. chinensis 28 5 33 15,2%
Megabyte. rosenbergii 5 5 10 50,0%
S t. rosal japonés 7 0 7 0,0%
JUNTOS 526 99 625 15,8%

Tabla 1. Resultados de la prueba SHIV usando PCR anidada en varias especies de camarones.

Los síntomas clínicos de la infección por SHIV incluyen una ligera decoloración en la superficie e incisión del hepatopáncreas, estómago e intestinos vacíos, una cáscara blanda de camarones parcialmente infectados y un cuerpo ligeramente rojizo en un tercio de los individuos. Estos síntomas no son similares a otras supuestas infecciones por iridovirus en otras especies de camarones Penaeid, camarones duros o langostas de agua dulce.

Las secciones histológicas indicaron que la enfermedad podría ser causada por una sospecha de infección viral con síntomas patogénicos obvios que no cumplían con las características histopatológicas de ningún virus conocido o infección por enfermedad de necrosis hepatopancreática aguda (AHPND). Utilizando tecnologías de secuenciación de ADN de alto rendimiento, determinamos que una muestra contenía virus iridiscente potencial y que el análisis filogenético de las dos proteínas no respaldaba este virus iridiscente, temporalmente denominado virus iridiscente de hemocitos de camarón (SHIV), que pertenece a todas las familias conocidas de Iridoviridae.

Pruebas de provocación y examen histopatológico

Realizamos experimentos experimentales utilizando inyecciones intramusculares invasivas o un régimen no invasivo, incluido el sondaje inverso o la infección per os, que transmitieron con éxito el agente infeccioso filtrado de L. vanname enfermo a animales sanos y causaron síntomas clínicos y cambios patológicos similares, lo que demuestra que el el virus es

Figura 1: Mortalidad acumulada de L. vannamei en infecciones experimentales. Se añadió filtrado de extracto de tejido a dos grupos de camarones mediante inyección intramuscular (IM) o anal rectal (rg). Otro grupo de camarones fue infectado por osinfección (per os). Los grupos de control fueron tratados de manera similar con tampón PPB-His en los grupos im (c) y rg (c), respectivamente, o alimentados con alimentos para camarones en el grupo per os (c). La mortalidad acumulada se muestra como el promedio de los datos de tres réplicas de cada grupo experimental (cada réplica incluyó 30 sujetos).

También utilizamos la hibridación in situ (ISH) con una sonda específica para detectar SHIV en secciones de L. vannamei infectadas. La hibridación in situ (ISH) es una técnica molecular que muestra la ubicación de secuencias específicas de ácidos nucleicos en tejidos o cromosomas, un paso fundamental para comprender la regulación, organización y función de los genes.

La sonda respondió a lesiones histológicas en tejido hematopoyético y hemocitos en los tejidos de las branquias, hepatopáncreas y periopodos obtenidos en las muestras, así como en el tejido experimental descrito en este estudio. Nuestros resultados fueron consistentes con los postulados de Rivers, creados por Thomas M. Rivers en 1973 para identificar el papel de un virus en particular como causa de una enfermedad en particular, para demostrar la etiología viral.

Figura 2: ISH usando una sonda de 279 pb marcada con digoxigenina para el virus iridiscente de hemocitos de camarón en secciones histológicas de L. vannamei. (a) – (d) tejidos hematopoyéticos, branquias, hepatopáncreas y periopodos en una muestra positiva para SHIV, respectivamente; (e) – (h) tejidos hematopoyéticos, branquias, hepatopáncreas y periopodos en una muestra SHIV negativa, respectivamente. En (a) – (d), se observaron señales azules en el citoplasma de los hematocitos de los tejidos hematopoyéticos, branquias, hepatopáncreas y periopodos. En (e) – (h), no se observó señal de hibridación en los mismos tejidos de L. vannamei SHIV negativo, excepto por algunas señales no específicas en la cutícula. Bar, 10 μm (ayb), 20 μm (cyd) y 50 μm (e – h) respectivamente.

El examen histopatológico de los tejidos de la muestra mostró impurezas basófilas y picnosis en los tejidos hematopoyéticos y hemocitos de las branquias, hepatopáncreas, periopodos y músculos. Utilizando técnicas de secuenciación de metagenómica viral (directamente a partir de material genético de muestras ambientales), obtuvimos secuencias parciales que interpretamos como posibles iridoviridae. Y los análisis filogenéticos que utilizan las secuencias de aminoácidos de las principales proteínas mostraron que se trata de un nuevo virus iridiscente, pero que no pertenece a las cinco familias conocidas de Iridoviridae.

Figura 3: Características histopatológicas de la muestra de L. vannamein fijada con alcohol-formalina-ácido acético (AFA) de Davidson 20141215 (a, c, eyd). Las flechas negras indican entradas basófilas y las flechas blancas indican núcleos caripiknóticos. (a) tinción de tejido hematopoyético con hematoxilina y eosina (H&E); (b) tinción H&E de branquias; (c) tinción H&E sinusal en el hepatopáncreas y (d) tinción H&E periopodica. Barra, 10 μm.

Después de comparar las propiedades morfológicas, fisiológicas y filogenéticas de nuestras muestras con las de otros virus iridiscentes, designamos temporalmente la sustancia etiológicamente activa como virus iridiscente del hemocito del camarón (SHIV), que puede causar el virus iridiscente del hemocito del camarón (SHIVD). Recomendamos la nueva familia Iridoviridae Xiairidovirus, que significa virus iridiscente del camarón.

Perspectivas

Mediante aislamiento, reinfección y caracterización histopatológica, hemos descubierto que el SHIV es un virus nuevo de la familia Iridoviridae y un patógeno de L. vannamei. Además, hemos desarrollado un ensayo de ISH y un método de PCR insertado para la detección específica de SHIV.

Los resultados de nuestro estudio destacan la necesidad de que los profesionales de la salud de los animales acuáticos bien capacitados y los agricultores con experiencia en la industria de la acuicultura del camarón presten más atención al SHIV y tomen medidas más efectivas para prevenir los brotes y los daños económicos causados ​​por el SHIV.

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