Saprolegniasis de huevos en un criadero comercial de sol

El sistema de control se desarrolló utilizando sulfato de cobre.

La mayoría de las operaciones de cultivo híbrido con rayas utilizan un cruce entre la lubina sol, la lubina blanca hembra y la lubina rayada macho.

La mayoría de las operaciones de acuicultura para la producción de lubinas rayadas híbridas, que comenzaron hace unos 30 años, ahora utilizan un cruce entre el sol, una hembra blanca y un macho rayada. La gonadotropina coriónica humana generalmente se inyecta en la cámara femenina para inducir la maduración final y la ovulación de los óvulos; los machos y las hembras se desovan a la mañana siguiente para producir huevos fertilizados. Los huevos se colocan en un frasco de incubación de McDonald’s y se mantienen con una solución de ácido tánico durante varios minutos para inhibir la pegajosidad (es decir, los grumos). Los huevos se incuban en agua corriente y la eclosión suele comenzar en 48 horas.

Los procedimientos óptimos de gestión del criadero son esenciales para garantizar el éxito de la producción de larvas soleadas. Un problema importante durante la incubación de huevos es el crecimiento de hongos (es decir, Saprolegnia spp.), Que pueden retener o destruir huevos sanos, y las enfermedades fúngicas se ven agravadas por la presencia de huevos muertos o en descomposición. Los únicos compuestos aprobados por la Administración de Drogas y Alimentos de los Estados Unidos (FDA) para controlar los hongos del huevo son 37 por ciento de formalina y 35 por ciento de peróxido de hidrógeno.

El crecimiento de hongos es un problema importante en la incubación de huevos de peces.

Sin embargo, el sulfato de cobre (CuSO4) se ha utilizado durante muchos años como medicamento a base de agua para controlar los parásitos protozoarios y las aguas de invierno en estanques de peces comerciales y recreativos, y las medidas para regular el uso de CuSO4 se han pospuesto en espera de los resultados de los estudios en curso . Etiqueta de ictiopiriasis y saprolegnias aprobada por la FDA en huevos de bagre de canal y huevos de bagre de canal. Por tanto, su uso como fármaco es actualmente aceptable.

En nuestro estudio, resumido aquí de la publicación original (North American Journal of Aquaculture 78: 243-250, 2016), realizamos una prueba in vitro para determinar la concentración de CuSO4 para controlar el crecimiento de hongos en un medio de cultivo, seguida de una prueba de toxicidad aguda. para determinar la concentración segura y letal. También realizamos un experimento en un criadero de sol comercial para determinar la concentración terapéutica ideal de CuSO4 para controlar la saprolegniasis en huevos al sol.

Prueba de incubación en Keo Fish Farms, Inc.

Configuración experimental

Los experimentos se realizaron en el Centro Nacional de Investigación en Acuicultura (SNARC) en Stuttgart, Stuttgart, Ark., EE. UU., Y en la piscifactoría Keo, una empresa comercial de luz solar con sede en Arkos Keos. Al comienzo del período de eclosión, el hongo para el experimento in vitro se aisló de los huevos en la piscifactoría Keo en los criaderos de McDonald’s (n = 3). Los hongos se cultivaron en SNARC y las muestras se identificaron como Saprolegnia ferax. El agua fresca de pozo de la piscifactoría de Keo también se transfirió a SNARC para su uso en los experimentos.

Los procedimientos detallados se pueden encontrar en la edición original. Para el experimento in vitro, desarrollamos un ensayo in vitro novedoso en placas de cultivo celular de fondo plano de seis pocillos para probar la eficacia de CuSO4. Realizamos un segundo experimento en SNARC para determinar la toxicidad del CuSO4 para las larvas de la luz solar. Los bioensayos se realizaron en recipientes de plástico de 1 litro (10 cm de diámetro superior, 9 cm de diámetro inferior x 13 cm de largo) que contenían 500 ml de agua de piscifactoría Keo. Cada contenedor contenía 10 larvas solares que eclosionaron durante ≤24 horas. El experimento se realizó en condiciones estáticas y se registró la mortalidad a intervalos de hasta 48 horas. Las concentraciones de CuSO4 fueron 10 y el control no tratado (n = 3 repeticiones por tratamiento, incluido el control). Las concentraciones nominales de CuSO4 oscilaron entre 0,125 y 64 mg / ly se eligieron para una mortalidad del 0 al 100 por ciento en 48 horas.

Resultados de la prueba con sulfato de cobre

Las propiedades químicas importantes del agua de las piscifactorías Keo, importantes para el estudio de la toxicidad y eficacia del Cu, incluyen pH = 7,9, alcalinidad = 216 mg / L (CaCO3), dureza = 266 mg / L (CaCO3) y carbono orgánico disuelto = 1,05 mg. / l.

La prueba in vitro utilizada para este estudio es ideal para su uso como paso inicial en la determinación de la eficacia de un compuesto en una variedad de aguas químicas u orgánicas; por esta razón, se utilizó agua de la piscifactoría de Keo. La prueba se realizó a 20 ° C, que fue la temperatura aproximada de la prueba de eficiencia. El control no tratado mostró un crecimiento fúngico normal, como se ve en SNARC.

Prueba in vitro: indica un aumento de 0 y 10 mg / l durante el tratamiento.

El tratamiento de 10 mg / l redujo este aumento, pero no tanto como el tratamiento de CuSO4 de 20 y 40 mg / l. La reducción máxima de hongos después de 48 horas se logró con 20 mg / l de CuSO4. Todos los tratamientos con CuSO4 difirieron significativamente del control (P <0,001).

Los valores medios de CL50 para las larvas de luz solar a las 24 y 48 horas fueron 5,4 (IC del 95% = 4,5-6,4) y 3,9 mg / L CuSO4 (IC del 95% = 3,3-4,6), respectivamente. Los valores de NOEC fueron 0,5 mg / l de CuSO4 durante 24 horas y 0,25 mg / l de CuSO4 durante 48 horas. El porcentaje medio de mortalidad para cada tratamiento se muestra en la Tabla 1. Las larvas no fueron alimentadas antes o durante el experimento, ya que la alimentación afectaría adversamente la calidad del agua y le daría al Cu un sitio de unión potencial, resultando en concentraciones más bajas de toxicidad. Las variables de calidad del agua durante las pruebas de toxicidad fueron aceptables; el nitrógeno amoniacal total al final de la prueba fue de 0,14 ± 0,04 mg / l (media ± DE); El pH fue de 7,8. El nivel medio de OD y la temperatura del agua fueron 89,3 ± 4,8 por ciento y 23,0 ± 0,1 ° C, respectivamente.

CuSO4 (mg / L) Mortalidad (%) 1hMortalidad (%) 2hMortalidad (%) 3hMortalidad (%) 4hMortalidad (%) 8hMortalidad (%) 24hMortalidad (%) 48h

0,125 0 0 0 0 0 0 0
0,25 0 0 0 0 0 0 0
0,5 0 0 0 0 0 0 3.3
1.0 0 3.3 3.3 6,7 6,7 10 10
2.0 0 0 3.3 3.3 3.3 10 10
4.0 3.3 3.3 6,7 6,7 10 13,3 30
8.0 3.3 3.3 10 10 16,7 73,3 100
16,0 10 16,7 26,7 30 43.3 100 100
32,0 23,3 40 63,3 80 93,3 100 100
64,0 40 80 100 100 100 100 100

En la prueba de eficacia, el volumen de huevos en cada cámara de incubación fue de 108,7 ± 4,5 ml (media ± DE) y el contador XPC (un dispositivo comercial que utiliza algoritmos preprogramados para corregir el número total de organismos en el recipiente). El OD y la temperatura fueron 93,7 ± 2,7 por ciento saturados y 19,2 ± 0,1 grados C, respectivamente, y el caudal a través de las incubadoras fue 1,15 ± 0,15 L / min.

Huevos infectados por hongos (izquierda) y huevos enteros normales (derecha) en frascos para incubar de McDonald’s.

Los huevos eclosionaron en 48 horas como se esperaba. El hongo fue severo en el grupo de control no tratado, y visualmente estaba presente menos a 10 mg / l de CuSO4 o más. La Tabla 2 muestra la tasa de eclosión promedio de los cuadrados más pequeños con cuatro repeticiones versus tres repeticiones. Se utilizó regresión lineal para determinar las tasas de tratamiento con CuSO4 para la supervivencia del huevo; el porcentaje de supervivencia para n = 4 es 22,55 + 0,597 × tasa de tratamiento (F = 22,47, P = 0,0008) y para n = 3 es 28,71 + 0,659 × tasa de tratamiento (F = 18,39, P = 0), 0034). Con base en estas ecuaciones, los valores predichos para cada tasa de tratamiento también se muestran en la Tabla 2. La mejor supervivencia fue 40 mg / l de CuSO4 (50,5% de supervivencia); Sin embargo, el tratamiento de 20 mg / l de CuSO4 (45,8% de supervivencia) fue estadísticamente similar y, por lo tanto, proporciona un mayor margen de seguridad con CuSO4.

En un experimento separado, se trataron huevos soleados con 20 mg / l de CuSO4 y se tomaron muestras a los 15 y 30 minutos y a las 1, 2, 4 y 12 horas para obtener el contenido de Cu (n = 2 repeticiones por tratamiento). El análisis de muestras de agua (n = 2) antes y 30 segundos después del tratamiento mostró concentraciones de 0.0 y 3.6 ± 0.49 mg / l Cu, respectivamente. La menor concentración de Cu en el agua después del tratamiento (70,7 por ciento del Cu calculado) se debió a la absorción inmediata de Cu por los huevos. La concentración en los huevos antes del tratamiento fue de 2,95 μg / g Cu; el rango durante el tratamiento osciló entre 54,0 y 67,3 μg / g Cu. Esto indica que el Cu se absorbe en la cáscara y puede tener un efecto más prolongado para repeler los hongos del huevo. Deberían planificarse experimentos futuros para abordar este problema.

CuSO4 (mg / L)% de supervivencia real n = 4% de supervivencia real n = 3% de supervivencia prevista n = 4% de supervivencia prevista n = 3

0 24,0 ± 9,0 años 27,7 ± 6,4 x 22,6 28,7
10 31,2 ± 9,0 años 31,4 ± 9,0 años 29,1 34,7
20 36,6 ± 21,1 zy 45,8 ± 13,0 zy 35,7 40,6
40 49,1 ± 3,9 z 50,5 ± 3,3 z 48,9 52,6

Como medida de precaución, se observaron periódicamente huevos y larvas de luz solar tratados con CuSO4 durante el crecimiento hasta 7,6 cm (3 pulgadas) para detectar deformidades u otros problemas de salud potenciales; los peces se declararon sanos en comparación con los alevines no tratados. Por lo tanto, el procesamiento de huevos soleados de 20 mg / l de CuSO4 debería ser seguro.

Perspectivas

Estos resultados indican que 20 mg / l de CuSO4 fue suficiente para controlar los hongos del huevo del hongo solar. Los resultados de este estudio demuestran la eficacia de CuSO4 para controlar la saprolegniasis y aumentar la supervivencia de las larvas soleadas en los criaderos de flujo continuo. Se podría suponer razonablemente que el CuSO4 puede ser eficaz contra otros huevos incubados en tales sistemas; por ejemplo, Ictaluridae (por ejemplo, bagre), Percidae (por ejemplo, lucioperca), Centrarchidae (por ejemplo, avutarda) y Salmonidae (por ejemplo, trucha arco iris y otros salmones). Las larvas de la luz solar pueden morir a la tasa de CuSO4 que se usa para tratar los huevos de saprolegniasis; por lo tanto, el tratamiento debe interrumpirse al inicio de la incubación. Los resultados de este estudio confirman que el CuSO4 puede ser una herramienta económica y valiosa para controlar la saprolegniasis en huevos soleados durante los criaderos.

El primer autor (Straus) hizo una presentación sobre el uso de sulfato de cobre en la acuicultura a principios de este año. Señaló: «El cobre es muy barato para que los criaderos traten los huevos de peces». Por ejemplo, tratar un comedero que nace de huevos de bagre con la concentración recomendada de peróxido de hidrógeno es de $ 0.89, tratar el comedero con formalina 73 centavos y tratar el comedero con sulfato de cobre 2 centavos. Straus ha descubierto que la cáscara de huevo protege con bagre de pollo, trucha de alto peso y arco iris con hasta 100 ppm de sulfato de cobre. Sin embargo, el cultivador debe conocer la química del agua y los peces de las aguas que salen del criadero, especialmente la alcalinidad, ya que el sulfato de cobre es muy tóxico en aguas de baja alcalinidad.

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