¿Predictor de EHP? “Un abogado global para la acuicultura

Es importante reducir el riesgo de patógenos similares a EHP / EHP

Camarón blanco del Pacífico (Penaeus vannamei) de un país latinoamericano con síntomas de WFS.

El síndrome fecal blanco (WFS) se refiere a la presencia de una cadena fecal blanca flotante en estanques de crecimiento de estanques (Penaeus monodon & P. ​​vannamei) en los países del sudeste asiático. Se cree que el síndrome está asociado con una serie de problemas en la granja, incluida la inhibición del crecimiento de camarones, diferencias de tamaño, alimentación reducida y mortalidad crónica.

Se han informado otras plagas entéricas, que también afectan al hepatopáncreas del camarón, en países donde se ha informado WFS. Estos incluyen hepatopenea de enterocitozona microsporídica (EHP), necrosis hepatopancreática aguda que causa Vibrio parahaemolyticus (VpAHPND) y Vibrio sp. Causada por necrosis séptica hepatopancreática (NPSH). La Figura 1 muestra los países del sudeste asiático donde se han notificado WFS y otras enfermedades entéricas.

Figura 1: Distribución de enfermedades entéricas, incluido el síndrome de heces blancas (WFS), EHP, AHPND y SHPN, en países del sudeste asiático.

El EHP, un microsporido intracelular que se replica en el citoplasma de las células epiteliales tubulares afectadas por el hepatopáncreas, es un patógeno emergente que afecta principalmente al camarón cultivado P. vannamei en varios países del sudeste asiático, incluidos Indonesia, Vietnam, China, Tailandia, India y Malasia. Las principales características clínicas de los camarones infectados con EHP son el retraso del crecimiento, lo que resulta en una mayor variabilidad en el tamaño. En la etapa avanzada, los camarones infectados con EHP suelen mostrar cáscaras blandas, letargo, consumo reducido de alimento y intestino medio vacío. La histología de los tejidos infectados indica varias etapas de desarrollo, incluidas las etapas de plasmodio y esporas.

En varias publicaciones, la causa de la WFS se ha asociado con diversas etiologías, que incluyen Vibriocholera, organismos similares a la gregarina, Bacilloplasma sp. y Phascolarctobacterium sp. También se ha sugerido que EHP no es la causa de WFS. Sobre la base de estas discrepancias en WFS, realizamos un estudio sistemático para identificar posibles asociaciones entre WFS y patógenos entéricos, incluido EHP, en dos regiones diferentes del mundo donde se ha informado EHP.

La primera parte del trabajo se llevó a cabo en un país asiático con antecedentes de EHP y WFS. Las muestras se recolectaron de estanques pequeños, uno con WFS y el otro sin WFS para camarones. Se recolectaron y analizaron muestras de hígado y páncreas por histología y qPCR para EHP.

Figura 2: Muestras de camarones con WFS (arriba a la izquierda); se observa el color blanco del tracto gastrointestinal extirpado (derecha); Las fijaciones húmedas del hepatopáncreas que muestran WFS indican una deformación severa y melanización de los túbulos del hepatopáncreas afectados y ausencia de células R (abajo a la izquierda).

El tejido hígado-pancreático de camarones de cada estanque cultivado se analizó por separado mediante PCR cuantitativa (qPCR). La Figura 3 muestra los resultados de las cargas de EHP en animales de estanques experimentados con WFS en comparación con WFS. Cuanto menor sea el valor del umbral del ciclo (Ct), mayor será la carga de EHP en la muestra.

Figura 3: PCR en tiempo real de EHP en camarones con WFS (N = 10) en comparación con camarones sin síntomas de WFS (N = 10).

Existe una clara diferencia en el número de copias de EHP entre los dos grupos de animales. El número medio de copias en el grupo WFS fue de 4 × 107 copias por μl de ADN y 1 × 105 copias por ADN de ADN en estanques no similares a WFS, que es más de 2 diferencias logarítmicas. Esto indica que los camarones con WFS pueden ser potencialmente más infecciosos para EHP que los camarones con WFS. La misma cadena de heces de camarón qPCR muestra resultados similares; es decir, la cantidad de excremento de camarón fecal fue mayor en EHP que en las heces de camarón WFS.

Posteriormente, en la misma área endémica de EHP, determinamos el número de copias de EHP en muestras tomadas de estanques con tres historias diferentes: estanques sin historial de WFS; estanques con WFS; y estanques con historial de WFS. La Figura 4 muestra el número de copias de EHP en animales de tres estanques diferentes.

Figura 4: Número de copias de EHP en tejidos hepatopancreáticos de camarón de estanques sin historial de WFS, estanques con WFS y estanques con historial de WFS.

Nuevamente, encontramos resultados similares a los resultados del primer experimento. El número de copias de EHP fue mayor en camarones de estanques con WFS (aproximadamente 1 × 107 copias), seguido de estanques con antecedentes de EHP (aproximadamente 4 × 104 copias) y estanques sin WFS y sin signos clínicos de enfermedad (aproximadamente 1 × 107 copias). 4 × 102 copias).

WFS en América

En el hemisferio occidental, en 2016 informamos la presencia de patógenos EHP y similares a EHP en camarones cultivados. Los camarones infectados con EHP mostraron signos clínicos similares en los países del sudeste asiático, incluida una dieta reducida, retraso del crecimiento y diferencia de tamaño. Dos años más tarde, describimos el primer caso de WFS en áreas donde anteriormente se había informado Penaeus vannamei infectado con EHP cultivado en América Latina. Las heces blancas y los camarones con heces blancas en el tracto gastrointestinal son similares en algunos países del sudeste asiático donde el WHS ocurre en áreas endémicas de EHP.

Los camarones que contienen WFS fueron analizados tanto por H&E como por PCR para identificar el agente etiológicamente activo asociado con esta patología. Los resultados de PCR y H&E se muestran en la Figura 5.

Figura 5: Confirmación de EHP en camarones Penaeus vannamei con WFS en América Latina. Se realizó PCR para amplificar el gen de la proteína de la pared de esporas (SWP) (izquierda) y el H&E de las muestras paralelas se muestra en el panel derecho (20X).

La histopatología de los camarones que muestran WFS muestra la presencia de plasmodio específico de EHP y estadios de esporas (Figura 5b). Las muestras analizadas mediante PCR anidada para la amplificación del gen de la proteína de la pared de las esporas (SWP) confirmaron la presencia de EHP.

El papel de SHPN en WFS

Tanto en el sudeste asiático como en América Latina, donde se ha informado WFS, EHP no es el único patógeno asociado con WFS. Los camarones analizados por H&E muestran, además de EHP, lesiones de necrosis hepatopancreática séptica o SHPN (Figura 6).

Figura 6: Ejemplo de lesiones de necrosis hepatopancreática séptica (SHPN) en hepatopáncreas de P. vannamei (10X) con WFS.

La SHPN es una enfermedad bacteriana causada principalmente por Vibrio spp., Ya sea patógena u oportunista por Vibrio spp. Vibrio oportunista siempre está en el hepatopáncreas; cuando el patógeno entérico primario causa daño al hepatopáncreas, son oportunistas contra Vibrio spp. obtener una entrada para colonizar el hepatopáncreas afectado y causar NPF.

Figura 7: La combinación de patógeno entérico primario, Vibrio spp oportunista y posibles factores ambientales desconocidos puede causar WFS en áreas endémicas de EHP.

Como se muestra en la Figura 7, y con base en nuestro análisis, encontramos una asociación entre WFS, EHP y SHPN en estanques cultivados, lo que sugiere que WFS es una posible respuesta fisiológica en camarones afectados por patógenos entéricos y posibles factores ambientales desconocidos.

Encontrar WFS en camarones cultivados en el hemisferio occidental es importante ya que podría usarse como un predictor de la presencia de EHP. Además, ayuda a explicar la fuerte asociación entre la sustancia activa EHP / similar a EHP y la presencia de heces blancas. Como no hay signos clínicos obvios de infección por EHP en una etapa temprana, los camarones cultivados en el área deben ser monitoreados de cerca para detectar EHP y heces blancas.

Perspectivas

Nuestro estudio muestra que existe una fuerte asociación entre el síndrome de heces blancas (WFS) y EHP en áreas endémicas de EHP. EHP en combinación con otros patógenos entéricos (incluido SHPN) y posibles factores desconocidos pueden causar síndrome de heces blancas.

En áreas endémicas de EHP, los camarones con signos clínicos de síndrome fecal blanco muestran un proceso de infección por EHP muy activo en estanques maduros. El síndrome de las heces blancas de la industria camaronera fecal estadounidense puede ser un espejo de lo que sucedió en el sudeste asiático hace 15 años, donde el EHP ocurrió por accidente, pero ahora se ha convertido en uno de los principales factores de riesgo sanitario para la industria camaronera en la región. . Se deben implementar estrategias de bioseguridad para minimizar el riesgo de propagación de patógenos similares a EHP / EHP en Estados Unidos.

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