Cómo preparar e interpretar los hemoderivados

Aprenda a identificar elementos celulares normales y anormales en la sangre.

Las manchas de tinción y las formas de las células ayudan a identificar los componentes celulares de los productos sanguíneos.

La investigación hematológica es de creciente interés e importancia en la piscicultura costera y de agua dulce en todo el mundo. Los resultados de estos estudios proporcionan información valiosa sobre el estado de salud de los peces y, por lo general, incluyen la determinación de los niveles de hemoglobina, el recuento de glóbulos rojos y blancos y los niveles de hematocrito.

Estos datos se pueden utilizar para calcular índices hematológicos clave, todos los cuales son útiles para estudiar los aspectos de biología, dieta, patología, fisiología y reproducción de las especies de peces de piscifactoría en cuestión.

La sangre se ensucia

Una parte integral y particularmente importante de la evaluación hematológica de los peces es la preparación, el examen microscópico y la interpretación de los hemoderivados teñidos. Al examinar los lubricantes, se puede determinar el aspecto morfológico de los diversos elementos celulares normales y anormales presentes en la sangre y calcular su número relativo a partir de su distribución porcentual.

Para obtener los mejores resultados, es esencial que las muestras de sangre se preparen y tiñen adecuadamente antes del examen microscópico. Cuando sea posible y de acuerdo con el tamaño o la etapa de la vida del pez, las muestras de sangre deberán prepararse a partir de muestras de sangre recién obtenidas con una jeringa heparinizada para un examen hematológico de rutina. Por lo general, estas muestras se toman de la vena de la cola o del corazón. En el caso de dedos u otros peces muy pequeños, suele ser suficiente cortar la vértebra caudal y utilizar una gota de sangre como muestra.

Se coloca una gota de sangre a 2 cm de un extremo en la superficie de un portaobjetos de microscopio limpio y sin grasa. La sangre se unta expandiendo suavemente esta gota de sangre hasta el borde del segundo portaobjetos, que forma un ángulo de 45 grados con el primero. Después de la preparación, el producto sanguíneo se seca suavemente al aire.

Cuando la suciedad se haya secado, marque el portaobjetos con un bolígrafo de diamante o similar, no con un bolígrafo grueso o un marcador que contenga tinta soluble en alcohol, junto con la información sobre la fuente y el número de código de la muestra de pescado correspondiente de la que se tomó la muestra. Si se sospecha una infección bacteriana, se debe preparar una segunda muestra de sangre para una tinción de Gram posterior. La segunda prueba puede detectar cualquier bacteria grampositiva o gramnegativa presente en la sangre o fagocitada en macrófagos.

Pintura Giemsa

El método de tinción de rutina que ofrece el mejor y más consistente resultado es la técnica de Giemsa. El frotis de sangre secado al aire se fija durante cinco minutos en metanol absoluto y se vuelve a secar al aire. Luego se coloca, junto con otras hojas de sangre pretratadas de manera similar, en un recipiente de tinción que contiene una parte de una mezcla recién preparada de nueve partes de una tinción de Giemsa líquida comercial en agua destilada tamponada a pH 6,4.

Deje que la solución de tinción actúe durante 10 minutos, luego elimine cualquier lubricante, lave cuidadosamente con agua destilada, deje secar al aire y luego examínela microscópicamente con aumentos de 10 a 100 veces el tamaño real. Es importante enfatizar que la solución de tinción siempre debe estar recién preparada.

El procedimiento de examen debe incluir al menos 30 campos microscópicos diferentes a lo largo de toda la extensión del frotis para que los resultados sean representativos y relevantes para cada frotis de sangre individual. La persona que realiza el estudio probablemente debe estar suficientemente familiarizada con la identificación de los diferentes tipos de células que pueden encontrarse en la sangre de las respectivas especies de peces.

La tecnología de pintura de Giemsa detecta lo siguiente:

  • Eritrocitos. Los eritrocitos maduros tienen un citoplasma de azul pálido a azul rosado y un núcleo de color púrpura azulado. En el citoplasma de los policromatocitos pueden aparecer áreas discretas que solo están parcialmente teñidas.
  • Leucocitos de granulocitos. Los pequeños gránulos en el citoplasma de los neutrófilos se vuelven de color rosa a lila. Los basófilos y eosinófilos más grandes se tiñen de color púrpura azulado (basófilo) o rojo anaranjado (eosinófilo).
  • Linfocitos y plaquetas. El citoplasma tiñe un núcleo de color azul pálido y el núcleo es de color púrpura azulado.
  • Monocitos / macrófagos. El citoplasma se vuelve azul pálido y el núcleo azul a violeta. En el caso de los macrófagos, a menudo hay vacuolas de diferentes tamaños en el citoplasma que pueden contener bacterias ingeridas.

Beneficios practicos

Los beneficios prácticos de un examen cuidadoso de las manchas de sangre de pescado teñidas son muchos y los resultados tienen un impacto significativo en el diagnóstico de ciertos problemas nutricionales, patológicos y toxicológicos.

Problemas nutricionales

La deficiencia de vitamina E a menudo se caracteriza por microcitosis y abundancia de células contaminadas como resultado de una mayor fragilidad de los eritrocitos. El número de policromatocitos y trombocitopenia a menudo disminuye, lo que luego impide que la sangre se coagule normalmente.

La deficiencia de tiamina (vitamina B1) se asocia con anemia microcítica, en la que se encuentra que muchos policromatocitos se distribuyen mitóticamente en la sangre periférica.

La deficiencia de vitamina B12 / folato se caracteriza por anemia hipocrómica y, a menudo, macrocítica con evidencia de división o segmentación del núcleo de eritrocitos. La deficiencia de folato en los alimentos se caracteriza por macrocitos normocrómicos y eritrocitos en división con núcleos en forma de reloj de arena. La anemia por deficiencia de hierro también se caracteriza por hipocromía y macrocitosis.

Problemas patologicos

La presencia de cuerpos involucrados en el citoplasma de los eritrocitos indica infecciones virales del tipo necrosis viral de eritrocitos y síndrome de cuerpos de inclusión de eritrocitos. Algunas infecciones bacterianas incluyen macrófagos que contienen bacterias ingeridas, como las causadas por ciertos estreptococos. Francisella especies, rickettsias, aeromonatos y vibrios.

La presencia de parásitos extracelulares e intracelulares de ciertos nematodos, como hemoflagelados, hemogregarinas y microfilarias, se confirma mediante el examen de hemoderivados que se tiñen fácilmente en el pescado.

Problemas toxicologicos

Los casos de aflatoxicosis suelen caracterizarse por anemia por microcitosis, poiquilocitosis y la presencia de una gran cantidad de elementos de eritrocitosis inmaduros en la sangre periférica. Como informaron previamente los autores, estos elementos producen un tipo característico de anemia dominado por tales elementos eritrocíticos inmaduros.

Nota editorial: Los autores han preparado CD-ROM ilustrados bilingües (inglés / español) para facilitar la identificación de células sanguíneas normales y anormales en el salmón del Atlántico y la tilapia. Actualmente también están preparando versiones en inglés y español de la Guía práctica de técnicas hematológicas para especies de peces de cultivo.

(Nota del editor: este artículo se publicó originalmente en la edición de julio / agosto de 2009 de ).

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